Differential replicative fitness of the four dengue virus serotypes circulating in Colombia in human liver Huh7 cells

ABSTRACT Dengue has been a significant public health problem in Colombia since the simultaneous circulation of the four dengue virus serotypes. The replicative fitness of dengue is a biological feature important for virus evolution and contributes to elucidating the behavior of virus populations and viral pathogenesis. However, it has not yet been studied in Colombian isolates. This study aimed to compare the replicative fitness of the four dengue virus serotypes and understand the association between the serotypes, their in vitro infection ability, and their replication in target cells. We used three isolates of each DENV serotype to infect Huh-7 cells at an MOI of 0.5. The percentage of infected cells was evaluated by flow cytometry, cell viability was evaluated by MTT assay, and the pathogenicity index was calculated as a ratio of both parameters. The replicative fitness was measured by the number of viral genome copies produced using quantitative PCR and the production of infectious viral progeny was measured by plaque assay. We showed that Huh-7 cells were susceptible to infection with all the different strain isolates. Nevertheless, the biological characteristics, such as infectious ability and cell viability, were strain-dependent. We also found different degrees of pathogenicity between strains of the four serotypes, representative of the heterogeneity displayed in the circulating population. When we analyzed the replicative fitness using the mean values obtained from RT-qPCR and plaque assay for the different strains, we found serotype-dependent behavior. The highest mean values of replicative fitness were obtained for DENV-1 (log 4.9 PFU/ml) and DENV-4 (log 5.28 PFU/ml), followed by DENV-2 (log 3.9 PFU/ml) and DENV-3 (log 4.31 PFU/ml). The internal heterogeneity of the replicative fitness within each serotype could explain the simultaneous circulation of the four DENV serotypes in Colombia.

Características da epidemia de dengue em Pinhalzinho, Santa Catarina, 2015-2016 / Características de la epidemia de dengue en Pinhalzinho, Santa Catarina, Brasil, 2015-2016 / Characteristics of the dengue epidemic in Pinhalzinho, Santa Catarina, Brazil, 2015-2016

Objetivo: Descrever as características da epidemia da dengue em Pinhalzinho, Santa Catarina, Brasil, e investigar os efeitos das variáveis climáticas sobre a infestação pelo mosquito Aedes aegypti. Métodos: Estudo ecológico, com dados sobre casos de dengue, hospitalizações e óbitos pela doença, em 2015 e 2016, além das variáveis meteorológicas e focos de Ae. aegypti, de 2015 a 2018. Resultados: No período epidêmico de 2015-2016, a taxa de incidência de dengue foi de 12.695,2/100 mil habitantes. Foi registrada maior incidência no sexo feminino (13.926,4/100 mil hab.) e nas faixas etárias acima de 50 anos (17.162,0/100 mil hab.). A temperatura média e a umidade relativa do ar apresentaram relação positiva com o aumento de focos de Ae. aegypti. Conclusão: A incidência de dengue durante a epidemia foi a maior já registrada no país. As condições climáticas devem ser consideradas no planejamento das ações de controle vetorial e prevenção à dengue.

Objetivo: Analizar las características de la epidemia de dengue en Pinhalzinho, Santa Catarina, Brasil, y evaluar los efectos de las variables climáticas en la infestación del mosquito Aedes aegypti. Métodos: Estudio ecológico con datos sobre casos de dengue , hospitalizaciones y óbitos en 2015 y 2016, además de las variables meteorológicas y focos de Ae. Aegypti de 2015 a 2018. Resultados: En el período epidémico de 2015-2016, la incidencia de dengue fue 12.695,2 casos/100 mil habitantes. Se registró la mayor incidencia en el sexo femenino y en el grupo de edad superior a los 50 años. El promedio de temperatura y humedad relativa del aire presentaron una relación positiva con el aumento de los brotes de Ae. aegypti. Conclusión: La epidemia fue la más grande registrada en el país. La evaluación del proceso epidémico y las condiciones climáticas se constituyen en importante herramienta para planificación del control vectorial y acciones de prevención al dengue.

Objective: To describe the characteristics of the dengue epidemic in Pinhalzinho, Santa Catarina, Brazil, and to investigate the effects of climate variables on Aedes aegypti mosquito infestation. Methods: This was an ecological study using data on dengue cases, hospitalizations and deaths in 2015 and 2016; in addition to climate variables and Aedes aegypti breeding grounds from 2015 to 2018. Results: In the 2015-2016 epidemic, the dengue incidence rate was 12,695.2/100,000 inhabitants. Higher incidence was registered in the female sex (13,926.4/100,000 inhabitants) and in the 50 years and over age group (17,162.0/100,000 inhabitants). Average temperature and relative humidity showed a positive relationship with increase in Aedes aegypti breeding grounds. Conclusion: Dengue incidence during the epidemic was the highest ever recorded in the country. Climate conditions must be considered when planning vector control and dengue prevention actions.

Miositis orbitaria en adolescente / Adolescents´ orbital myositis

Introducción: La miositis orbitaria aguda es una afección inflamatoria de la musculatura extrínseca ocular muchas veces de causa desconocida. Forma parte de un grupo de afecciones inflamatorias orbitarias inespecíficas englobadas bajo el término de pseudo tumor orbitario. Afecta principalmente a las mujeres jóvenes. Objetivo: Describir el caso de una adolescente con miositis orbitaria aguda, afección inflamatoria poco frecuente en la edad pediátrica. Presentación del caso: Se trata de una adolescente de 14 años, mestiza, femenina, quien sufrió dengue por tres ocasiones poco tiempo antes de presentarse con dolor ocular del ojo izquierdo, fiebre elevada intermitente, protrusión ocular intermitente, vómitos, cefalea, decaimiento, pérdida de peso y de apetito. El ojo izquierdo presentaba edema del parpado superior y limitación a la abducción, musculatura ocular extrínseca: diplopía horizontal a mirada derecha a izquierda. El ultrasonido ocular informa presencia de imagen quística que no impresiona ser de contenido hemático. El resultado de la tomografía axial computarizada de órbita y cráneo simple fue compatible con diagnóstico de miositis orbitaria. Se indicó tratamiento inmediato con esteroides orales y se remitió al Instituto de Oftalmología Ramon Pando Ferrer para seguimiento. Conclusiones: La miositis orbitaria exige un alto índice de sospecha para un diagnóstico y tratamiento correcto. El dengue pudiera estar implicado en la etiología de la enfermedad(AU)

Introduction: Acute orbitary myositis is an inflammatory condition of the extrinsic ocular musculature, often of unknown cause. It is part of a group of non-specific orbital inflammatory conditions encompassed by the term of orbital pseudotumors. It mainly affects young women. Objective: To describe the case of a teenager with acute orbital myositis which an inflammatory condition not frequent in the pediatric ages. Case presentation: This is a 14-year-old, mixed-race, female patient, who suffered dengue three times before presenting ocular pain in the left eye, intermittent high fever, intermittent ocular protrusion, vomiting, headache, weakness, loss of weight and appetite. The left eye presents edema of the upper eyelid and limitation in abduction. The extrinsic ocular musculature presented: horizontal diplopia in right to left gaze. The ocular ultrasound informs: cystic image that does not impress to be of hematic content. A computerized axial tomography of the orbit and simple skull was performed, and the result was compatible with the diagnosis of orbital myositis. Immediate treatment with oral steroids was indicated and the patient was sent to the Ramon Pando Ferrer Ophthalmology Institute for follow-up. Conclusion: Orbital myositis requires a high index of suspicion for a correct diagnosis and treatment. Dengue seems to be involved in the etiology of the disease(AU)

Clinical and epidemiological teaching of dengue through simulated practice / Enseñanza clínica y epidemiológica de dengue por medio de la práctica simulada / Ensino clínico e epidemiológico de dengue por meio da prática simulada

ABSTRACT Objective: to describe the experience of clinical teaching on dengue and the practice of epidemiological surveillance using problematization methodology. Method: report of experience on educational activity with undergraduate nursing students, held in March 2016, at a public university in the city of São Paulo, conceived in four stages: dialogic lecture, active search of Aedes aegypti, case study and simulation of nursing consultation to individuals with dengue. Results: The activity allowed to retrieve previous knowledge about the disease, respond to exercises that addressed different clinical situations and epidemiological surveillance, including in situ evaluation of possible mosquito outbreaks, and discuss the need to expand prevention and health of the individual and the community, the impact of the media in the dissemination of cases and the coping difficulties experienced in the different levels of attention. Conclusion: the methodology adopted enabled qualified training of students to cope with dengue.

RESUMEN Objetivo: describir la experiencia de enseñanza clínica sobre la dengue y la práctica de vigilancia epidemiológica utilizando metodología de la problematización. Método: relato de experiencia sobre actividad educativa con graduandos de Enfermería, realizada en marzo de 2016, en una universidad pública de la ciudad de São Paulo, concebida en cuatro etapas: clase expositiva dialogada, busca activa del Aedes aegypti, estudio de caso y simulación de consulta de enfermería a individuos con dengue. Resultados: La actividad permitió rescatar conocimientos previos sobre la enfermedad, responder a ejercicios que abordaban distintas situaciones clínicas y de vigilancia epidemiológica, incluyendo evaluación "in loco" de posibles focos del mosquito, y discutir la necesidad de ampliación de las acciones de prevención y promoción de la salud del individuo y colectividad, el impacto del medio de comunicación en la divulgación de los casos y las dificultades de enfrentamiento vividas en los diferentes niveles de atención. Conclusión: la metodología adoptada posibilitó capacitación cualificada de los alumnos para enfrentamiento de la dengue.

RESUMO Objetivo: descrever a experiência de ensino clínico sobre a dengue e a prática de vigilância epidemiológica utilizando metodologia da problematização. Método: relato de experiência sobre atividade educativa com graduandos de Enfermagem, realizada em março de 2016, em uma universidade pública da cidade de São Paulo, concebida em quatro etapas: aula expositiva dialogada, busca ativa do Aedes aegypti, estudo de caso e simulação de consulta de enfermagem a indivíduos com dengue. Resultados: A atividade permitiu resgatar conhecimentos prévios sobre a doença, responder a exercícios que abordavam distintas situações clínicas e de vigilância epidemiológica, incluindo avaliação "in loco" de possíveis focos do mosquito, e discutir a necessidade de ampliação das ações de prevenção e promoção da saúde do indivíduo e coletividade, o impacto da mídia na divulgação dos casos e as dificuldades de enfrentamento vivenciadas nos diferentes níveis de atenção. Conclusão: a metodologia adotada possibilitou capacitação qualificada dos alunos para enfrentamento da dengue.

Chikungunya in Pakistan

The IHR National Focal Point of Paki-stan recently notified WHO of laboratory-confirmation of Chikungunya in 5 blood samples collected from Sindh province between 19 to 20 December 2016

A competência vetorial do Aedes aegyptiassociada à genética populacional na cidade de Belo Horizonte, Minas Gerais

A Dengue é uma doença emergente, causada por quatro sorotipos do DENV (DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4) pertencentes ao gênero Flavivirus e à família Flaviviridae. O vírus é transmitido pela picada de mosquitos fêmeas do gênero Aedes, sendo o Aedes aegypti o vetor primário. Estima-se 390 milhões de infecções anuais e 22.000 mortes, principalmente em crianças no mundo (WHO, 2016). A presença e a alta densidade dos vetores intensifica a necessidade de ações de controle. No entanto, um importante fato precisa ser considerado: as populações de mosquitos variam na sua permissividade para o desenvolvimento do flavivírus. A cidade de Belo Horizonte, alvo desse estudo, passou por 6 epidemias da doença nos últimos 20 anos (PBH, 2016). Os ovos dos Ae. aegypti de cada regional administrativa foram coletados pela Secretaria Municipal de Saúde separadamente e colonizados no insetário do LEM. Os adultos foram submetidos à extração de DNA, o qual foi amplificado para a sequência total de ITS. As análises filogenéticas foram realizadas com o software MEGA6. Em nosso estudo filogenético com as populações de Ae. aegypti de Belo Horizonte, observamos clusters melhores definidos e valores mais altos de bootstrap para três regionais: Oeste (O), Leste (L) e Nordeste (ND)

Essas foram selecionadas para as demais análises. Mosquitos fêmeas dessas regionais foram infectadas experimentalmente com DENV-2 e o vírus foi detectado através da RT-qPCR nas amostras dissecadas dos corpos e cabeças contendo as glândulas salivares. As análises das regionais ND, L e O revelou, em 7dpi taxas de infecção de 70, 80 e 70%, respectivamente. Em 14 dpi, as taxas foram de 80% para a regional ND e de 90% para as regionais L e O. A competência vetorial das três populações em estudo variou de 50 à 70%. Não observamos diferenças estatísticas entre nenhum os grupos Realizamos a análise do ITS dos indivíduos submetidos à infecção experimental. Não observamos o padrão de clusters encontrado anteriormente. No entanto, foi possível observar dois indivíduos negativos agrupados, ambos provenientes da regional nordeste, o que pode ser um fraco indicativo (devido ao número de amostras) de fenótipo característico para as amostras negativas

Relación genética del virus dengue 1 aislado en Cuba durante la epidemia de 1977 / Genetic relationship of dengue virus 1 isolated in Cuba, 1977

Introducción: el dengue es una enfermedad aguda causada por cuatro serotipos del virus del dengue (DENV-1 al 4) y transmitida al hombre por el mosquito Aedes aegypti. En Cuba, la primera epidemia de dengue con confirmación de laboratorio ocurrió en 1977, identificándose al DENV-1 como agente causal. Se plantea que el virus se dispersó en varios países de Latinoamérica y el Caribe partir de su introducción en Jamaica en 1977. Objetivos: explicar la caracterización molecular y determinar la relación genética del DENV-1 aislado en Cuba, 1977. Métodos: a partir de un aislamiento de DENV-1 obtenido en Cuba en el año 1977 conservado en el Banco de Cepas del Laboratorio Nacional de Referencia de Arbovirus (Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí) se realizó la amplificación y secuenciación nucleotídica del gen de la envoltura con cebadores específicos. A partir de la secuencia obtenida se construyó un árbol filogenético de Máxima Verosimilitud, utilizando secuencias de cepas de DENV-1 circulantes a nivel mundial. Resultados: el aislamiento de DENV-1 correspondiente a la epidemia cubana de 1977, se agrupó dentro del genotipo I, relacionándose genéticamente con la cepa de Referencia Hawaii/1943. Es significativo que, el resto de los aislamientos de Latinoamérica de ese mismo período pertenecen al genotipo V, reconocido como el genotipo Americano/Africano. Conclusiones: los resultados del presente trabajo indican que durante la epidemia cubana de 1977 circuló una cepa de DENV-1 del genotipo I, lo que constituye la primera evidencia sobre la presencia de este genotipo en la región de Latinoamérica y el Caribe. No obstante, este hallazgo no descarta la posibilidad de una co-circulación de los genotipos I y V(AU)

Introduction: dengue is an acute disease caused by four dengue virus serotypes (DENV-1 to -4) and transmitted to humans by Aedes aegypti mosquitoes. The first laboratory confirmed dengue epidemic in Cuba occurred in 1977, with DENV-1 as the causative agent. It has been stated that the virus spread to several Latin American and Caribbean countries after being introduced in Jamaica in 1977. Objectives: perform a molecular characterization and determine the genetic relationship of DENV-1 isolated in Cuba in 1997. Methods: Based on a DENV-1 isolate obtained in Cuba in the year 1997 and preserved at the Strain Bank of the National Arbovirus Reference Laboratory (Pedro Kouri Tropical Medicine Institute), nucleotide amplification and sequencing was performed of the envelope gene using specific primers. Starting from the sequence obtained, a maximum likelihood phylogenetic tree was developed using sequences of DENV-1 strains circulating worldwide. Results: the DENV-1 isolate corresponding to the Cuban 1977 epidemic was classed as genotype I and genetically related to the reference strain Hawaii 1943. It is noteworthy that the remaining Latin American isolates from that period belong to genotype V, recognized as the American/African genotype. Conclusions: results show that a DENV-1 strain of genotype I circulated during the Cuban 1977 epidemic. This is the first evidence of the presence of this genotype in the Latin American and Caribbean region. However, this finding does not rule out the possibility of co-circulation of genotypes I and V1(AU)

Chlkungunya in Somalia

During the month of May 2016, Somalia reported few sporadic cases of Chikungunya from its capital city–Mogadishu. At-least 11 blood samples were tested positive for chikungunya at the Kenya Medical Research Institute [KEMRI]. The tests were done using Real Time PCR as well as ELISA

Xenomonitoramento de populações de Aedes aegypti e Aedes albopictus para o Dengue virus em Belo Horizonte, uma cidade de alto risco para a incidência de epidemias

Dengue é considerada a mais relevante arbovirose que afeta seres humanos, e constitui grave problema de saúde pública. A detecção de Dengue virus (DENV) por RT-PCR em Tempo Real, em mosquitos vetores do gênero Aedes, tem se mostrado importante ferramenta na vigilância epidemiológica. A presente pesquisa verificou a presença de DENV em mosquitos fêmeas de Ae. aegypti e Ae. albopictus nos Distritos Sanitários (DS) Pampulha, Norte e Leste, de Belo Horizonte, Minas Gerais. Foram utilizadas armadilhas BG-Sentinel Full Version®, em capturas semanais de mosquitos, realizadas em quatro períodos: primeiro (dezembro de 2010 a maio de 2011), segundo (outubro de 2011 a maio de 2012), terceiro (outubro de 2012 a maio de 2013) e quarto (outubro de 2013 a maio de 2014). Foi instalado um total de 60 armadilhas (20 por DS). Após a identificação, as fêmeas de Ae. aegypti foram separadas em pools formados por um até 10 exemplares, e as fêmeas de Ae. albopictus foram separadas de forma individual. Procedeu-se com extração de RNA viral e RT-PCR em Tempo Real para a pesquisa de DENV. Foram coletadas 10.662 fêmeas de Ae. aegypti sendo 1.504 (14,10%), 2.516 (23,59%), 3.728 (34,98%) e 2.914 (27,33%) no primeiro, segundo, terceiro e quarto períodos respectivamente. Estas fêmeas foram agrupadas em 6.056 pools, dos quais 343 (5,66%) foram positivos para o DENV. Em relação ao Ae. albopictus foram coletadas 511 fêmeas, sendo 117 (22,89%), 44 (8,61%), 199 (38,96%) e 151 (29,54%) no primeiro, segundo, terceiro e quarto períodos respectivamente. Destas, 79 (15,45%) foram positivas para o vírus. Houve elevada ocorrência de fêmeas deAe. aegypti e Ae. albopictus nas áreas pesquisadas, positivas para o DENV. Isso mostra a importância da adoção de medidas de controle no sentido de reduzir as notificações da infecção em seres humanos.

Estrés oxidative-nitrosativo y dengue: revisión sistemática de estudios in vivo e in vitro / Oxidative-nitrosative stress and dengue disease: a systematic review of in vivo/in vitro studies

Objective: In this systematic review the aim was to summarise the in vivo/in vitro evidence on the role of oxidative-nitrosative stress in pathogenesis of dengue. Methods: We searched electronic databases (PubMed, EMBASE, The COCHRANE library, ScienceDirect, Scopus, SciELO, LILACS via Virtual Health Library, Google Scholar) using the term: dengue, dengue virus, severe dengue, oxidative stress, nitrosative stress, antioxidants, oxidants, free radicals, oxidized lipid products, lipid peroxides, nitric oxide, and nitric oxide synthase. Articles were selected for review by title and abstract excluding letter, review, epidemiological studies, and duplicates studies. Selected articles were reviewed for used animal model or cell cultures, original purposes, strain of virus or type of antibody, main outcomes, methods, and oxidative-nitrosative stress markers values. Results: In total, 4330 non-duplicates articles were identified from computerized searches of reference databases, of which 32 were eligible for full text searching. The results of in vivo studies were obtained from monkey and knockout and/or wild-type mice. Human peripheral blood mononuclear cells were cell cultures most commonly used in identified in vitro studies, following by human endothelial cells cultures. DENV-2 strains were most used. Conclusions: In conclusion, a large body of in vivo and in vitro evidences showed that oxidative/nitrosative stress can be related to production of pathogenesis-related protein, increased susceptibility of mice to DENV infection, hemorrhage development in mice, proinflammatory cytokines and transcriptional factor expression, and DENV replication in various cell cultures(AU)

Objetivo: sistematizar las evidencias in vivo/in vitro de la participación del estrés oxidativo-nitrosativo en el curso de la infección por virus del dengue. Métodos: revisión sistemática de estudios observacionales en las bases de datos (PubMed, EMBASE, The COCHRANE library, ScienceDirect, Scopus, SciELO, LILACS via Virtual Health Library, Google Scholar) utilizando las siguientes palabras clave: dengue, dengue virus, severe dengue, oxidative stress, nitrosative stress, antioxidants, oxidants, free radicals, oxidized lipid products, lipid peroxides, nitric oxide y nitric oxide synthase. La selección inicial fue realizada a partir del título y resumen excluyéndose: cartas para editor, revisiones, estudios con diseños epidemiológicos y estudios duplicados. A cada artículo seleccionado, se le revisó el objetivo o propósito, cultivos celulares o modelos animales utilizados, cepas víricas o tipo de anticuerpos utilizados, métodos y valores de los marcadores de estrés oxidativo-nitrosativo. Resultados: de 4330 publicaciones encontradas, 32 estudios cumplieron con los criterios de inclusión. Se utilizaron primates no humanos y ratones knockout o tipo salvaje para la obtención de las evidencias in vivo. Los cultivos celulares más utilizados fueron de células mononucleares de sangre periférica y de células endoteliales humanas. Las cepas más utilizadas en los ensayos correspondieron al serotipo 2 del virus dengue. Conclusiones: existen evidencias in vivo/in vitro que muestran la posible asociación entre el estrés oxidativo-nitrosativo con: producción de proteínas relacionadas con la patogénesis del dengue, incremento en la susceptibilidad de ratones por la infección por dengue, desarrollo de hemorragias en modelo de ratón, expresión de citoquinas proinflamatorias y replicación viral en varios cultivos de células tanto humanas como de origen animal(AU)

Obtención de la sublínea celular CLA-HT. Estudio de su sensibilidad para el aislamiento y multiplicación de los virus del dengue / Obtainment of CLA-HT cell subline and study of its susceptibility for the isolation and multiplication of the dengue virus

Introducción: en el diagnóstico de dengue es importante la determinación del serotipo viral. A pesar de existir otros métodos, el aislamiento viral en cultivos de células y la identificación por la técnica de inmunofluorescencia siguen siendo muy utilizados. Por lo tanto, la búsqueda de sistemas celulares más sensibles ha sido un tema reiterado durante muchos años para el virus dengue y otros agentes. Objetivo: obtener una sublínea celular a partir del clon CLA-1 (Aedes pseudoscutellaris) que crece a 28 ºC, capaz de multiplicarse a 33ºC (CLA-HT) y evaluar su utilidad para el aislamiento y la identificación de los virus del dengue. Métodos: a partir del clono CLA-1 de la línea celular AP-61(Aedes pseudoscutellaris) se obtuvo por selección una cepa o sublínea celular CLA-HT capaz de crecer a 33 °C. Se estudió su sensibilidad para la multiplicación de los 4 serotipos del virus del dengue y su eficiencia para el aislamiento directo de sueros de pacientes en fase aguda de la enfermedad, ambos comparativamente con la línea C6/36HT (A. albopictus). Resultados: la sublínea CLA-HT permitió el crecimiento de los 4 serotipos del virus dengue aunque para algunos requirió más tiempo que la C6/36 HT. Para el aislamiento a partir de muestras de sueros colectadas de individuos en fase aguda, la sublínea CLA-HT detectó el virus en el 40 por ciento de las muestras, mientras que C6/36 detectó el virus en el 50 por ciento. Discusión: CLA-HT es capaz de detectar todos los serotipos del virus dengue a partir de las 96 horas pos inoculación, por lo que es útil para la investigación como sistema alternativo y su eficiencia de aislamiento directo es buena para aplicar en grandes brotes. Además, la principal ventaja es que es posible utilizarla para proporcionar una respuesta rápida a situaciones emergentes en laboratorios de escasos recursos, ya que no precisa de condiciones de incubación con CO2. Conclusiones: se obtuvo una sublínea CLA-HT a partir de la línea CLA-1 capaz de crecer a 33ºC, la cual detecta los 4 serotipos del virus dengue. Su eficiencia de aislamiento es ligeramente menor que la sublínea C6/36 HT, pero se puede utilizar como sistema alternativo para el aislamiento de los virus dengue sobre todo en laboratorios con bajos recursos que no cuenten con condiciones óptimas de incubación(AU)

Introduction: the identification of viral serotypes is an important issue for dengue diagnosis. Despite the existence of other identification methods, the viral isolation in cell cultures and determination by immunofluorescent technique remain as the most used. Therefore the search for more sensitive cellular systems has been a repeated topic during many years for dengue virus and other agents. Objective: to obtain a cell subline from CLA-1 clone (Aedes pseudoscutellaris), that grows at 28 °C, capable of multiplying at 33 °C (CLA-HT)and to evaluate its usefulness for Dengue virus isolation and identification. Methods: by using a CLA-1 clone of the AP-61(Aedes pseudoscutellaris) cell line, it was possible to obtain a strain or cell subline CLA-HT capable of growing at 33 oC (CLA-HT) through a temperature selection method. Its sensitivity for the multiplication of the 4 dengue virus serotypes and its efficiency for direct virus isolation from acutely ill patients' sera were studied in comparison to C6/36 HT cell line (A. albopictus). Results: four dengue virus serotypes grew in CLA-HT cell subline but some serotypes were detected later in CLA-HT than in C6/36 HT. For dengue isolation from serum samples taken in acutely ill patients, the CLA-HT subline detected 40 percent positive samples whereas C6/36 HT did 50 percent. Discussion: CLA-HT is able to detect all dengue virus serotypes from 96 hours on post inoculation. It makes the new cell line useful for research as an alternative system and the direct isolation efficiency is good to be applied in large outbreaks. The most important advantage of CLA-HT is the possibility of giving rapid answer in emergency situations in low resource laboratories since it does not require special incubation conditions with CO2. Conclusions: a CLA-HT subline was obtained from CLA-1 line and it grows at 33 oC and capable of detecting 4 dengue virus serotypes. Its isolation efficiency is slightly lower than that of C6/36 HT subline, but it may be used as an alternative system for dengue virus isolation, mainly in resource-poor laboratories that do not have the optimal conditions for incubation(AU)

Perfil de resistencia a insecticidas en una cepa de Aedes aegypti (Linnaeus) de la región Caribe de Costa Rica / Insecticidal resistance profiles of an Aedes aegypti (Linnaeus) strain from the Caribbean Region of Costa Rica

Introducción: el dengue constituye la principal enfermedad de transmisión vectorial en Costa Rica. El control del vector Aedes aegypti consiste en la aplicación de piretrinas y temefós, por lo cual es importante monitorear la aparición de resistencia a estos insecticidas. Materiales y métodos: se efectuaron bioensayos con larvas de Ae. aegypti procedentes del cantón de Guácimo en la Región Caribe de Costa Rica. Grupos de 20 larvas fueron expuestos por 24 horas a concentraciones de insecticidas que provocaran una mortalidad entre el 2 y el 100 por ciento. Las pruebas fueron efectuadas por quintuplicado y se calculó la concentración letal 50 por ciento (CL50). Como control susceptible se empleó la cepa Rockefeller. Un radio de resistencia 50 por ciento (RR50) fue calculado para cada insecticida. En caso de resistencia se repitieron los ensayos exponiendo las larvas a butóxido de piperonilo (PB) y S, S, S, tributilfosforotritioato (DEF) para perfilar el mecanismo enzimático vinculado con dicha resistencia. Resultados: no se observó resistencia a temefós y deltametrina, pero sí se encontró resistencia incipiente a la cipermetrina (CL50 = 0,00845 mg/L, rango: 0,00664-0,01038, RR50 = 6,07). El análisis con sinergistas determinó un radio de singergismo (RS) de 19,2 para el PB y de 0,9 para DEF. Discusión: los resultados demuestran que existe un proceso de desarrollo de resistencia a la cipermetrina en los mosquitos Ae. aegypti en esta localidad, el cual está relacionada con la actividad citocromo P450 monooxigenasa. Esto alerta a las autoridades para sustituir dicho insecticida y así asegurar el adecuado control del vector sin la generación de resistencia(AU)

Introduction: dengue is the main vector-borne disease in Costa Rica. The control of the vector Aedes aegypti covers the application of pyrethrins and temephos. For this reason, it is important to monitor the development of resistance to these insecticides. Material and Methods: bioassays were performed using Ae .aegypti larvae from the county of Guacimo in the Caribbean region of Costa Rica. Twenty-larvae groups were exposed to insecticidadl concentrations for 24 hours, which would generate 2 to 100 percent mortality. The tests were performed five times, and a 50 percent lethal concentration (LC50) was calculated. The Rockefeller strain was used as susceptibility control. A 50 percent resistance ratio (RR50) was calculated for each insecticide. When resistance occurred, tests were repeated by exposing the larvae to piperonyl butoxide (PB) and S, S, S, tributylphosphorotrithioate (DEF) in order to determine the enzymatic mechanism associated with this resistance. Results: no resistance to temephos or deltamethrin was observed, but emerging resistance to cypermethrin was detected (LC50 = 0.00845 mg/L, range from 0.00664 to 0.01038, RR50 = 6.07). The synergistic analysis determined a synergism ratio (SR) of 19.2 for PB and 0.9 for DEF. Conclusions: these results show that there is a process of developing resistance to cypermethrin in Ae. aegypti mosquitoes of this county, which is associated with cytochrome P450 monooxygenase activity. This alerts authorities to the need of replacing this insecticide and ensure the appropriate vector control without generating resistance(AU)

Avaliação de testes diagnósticos para a identificação da infecção pelo vírus da dengue em pacientes com síndrome febril aguda / Diagnostic assessment tests to identify the infection by the dengue virus in patients with acute febrile syndrome

A dengue é atualmente um dos principais problemas de saúde pública do mundo e segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS) é a doença que mais acomete o homem na atualidade. Sua incidência vem aumentando e estima-se que 50-100 milhões de pessoas desenvolvam a doença a cada ano no mundo. O diagnóstico laboratorial da dengue é realizado por diferentes tipos de testes, entre eles estão o isolamento viral, o RT-PCR, e a detecção por ELISA ou por meio de testes rápidos do antígeno viral NS1 e de anticorpos IgM específicos contra o vírus. A fim de contribuir para um melhor entendimento sobre a validade destes testes em diferentes circunstâncias, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar a validade dos diferentes métodos laboratoriais no diagnóstico da dengue. A sensibilidade dos testes diagnósticos, ELISA IgM, ELISA NS1 e RT-PCR, foi avaliada de forma individual e de forma combinada utilizando amostras de soro de 623 pacientes incluídos em um estudo prospectivo de vigilância de base populacional entre fevereiro e julho de 2010...

Dengue is currently one of the main problems of public health and the world according to the World Health Organization (WHO) is the disease that affects more men today. Its incidence is increasing and it is estimated 50-100 million people develop the disease each year worldwide. Laboratory diagnosis of dengue is done by testing different types, which include viral isolation, RT-PCR, and detection by ELISA or by rapid viral tests NS1 antigen and specific IgM antibodies against the virus. In order to contribute to a better understanding of the validity of these tests in different circumstances, the aim of this study was to evaluate the validity of different laboratory methods for diagnosis of dengue. The sensitivity of diagnostic tests, IgM ELISA, ELISA NS1 and RT-PCR was evaluated individually and in combination form using serum samples from 623 patients enrolled in a prospective population-based study of surveillance between February and July 2010...

Diferenças na variação da competência vetorial entre nove populações de Aedes aegypti do munícipio de Belo Horizonte, Minas Gerais, ao Dengue virus 2 / Differences in variation of vector competence between Nine populations of Aedes aegypti the municipality of Belo Horizonte, Minas Gerais, the virus Dengue 2

No Brasil, as epidemias de dengue ainda estão difundidas por todo o país. Além da falta de conhecimento de como os surtos da doença são capazes de iniciar e sustentar o seu ciclo de transmissão, existem poucos estudos avaliando a habilidade das populações brasileiras de A. aegypti para transmitir o vírus. O objetivo do nosso estudo foi comparar a susceptibilidade de A. aegypti capturados nas nove regionais de Belo Horizonte, ao DENV-2, nos anos de 2009 e 2011. Para tal finalidade, parâmetros como a taxa de infecção (IR), competência vetorial (CV) e a taxa de infeção disseminada(DIR) foram determinadas. Os ovos dos A. aegypti de cada regional foram coletadas separadamente e colonizados em um insetário. As fêmeas adultas foram infectadas experimentalmente com DENV-2 e o vírus foi detectado através da RT-qPCR nas amostras dos corpos e cabeças dos mosquitos. Os dados foram analisados através do programa estatístico Social Sciences – versão 17. A IR variou de 40% a 82,5% em 2009 e de 60% a 100% em 2011. A CV variou de 25% a 77,5% em 2009 e de 25% a 80% em 2011. Já a DIR oscilou de 68,7% a 100% em 2009 e 38,4% a 86,8% em 2011...

Os resultados foram avaliados por um modelo logístico utilizando IR como co-variável. Em 2009, as regionais Norte, Barreiro, Centro-Sul e Venda Nova mostraram uma forte associação. Em 2011, uma forte associação foi observada entre as regionais Centro-Sul,Venda Nova, Oeste e Nordeste. Utilizando a competência vetorial com co-variável, em 2009, as regionais Centro-Sul e Venda Nova apresentaram associação mais relevante. Já em 2011, as regionais Centro-Sul, Venda Nova e Barreiro apresentaram associação significativa. Quando os dados de DIR foram analisados pelos modelos de regressão logística, Pampulha, Centro-Sul, Venda Nova, Oeste, Nordeste e Leste (2009), bem como, Centro-Sul, Venda Nova e Oeste (2011) foram as regionais que apresentaram a associação mais forte. Concluí-se que as populações de A. aegypti de Belo Horizonte exibiram ampla variação na sua competência vetorial para transmitir DENV-2. Por isso,dados e estratégias de controle do vetor, de cada uma das regionais, precisam estar disponíveis para os órgãos competentes. Análises futuras precisam ser desenvolvidas para um melhor entendimento das razões pelas quais ocorre esta grande variabilidade na CV e como estes parâmetros se correlacionam com os achados epidemiológicos dos anos seguintes...

Dengue virus serotype 4 in a highly susceptible population in southeast Brazil

In Minas Gerais, Brazil, almost 500,000 dengue fever cases were reported to the State Surveillance System between November 2012 and July 2013. An analysis of the laboratory-confirmed cases revealed a higher age-specific incidence in adults and a higher case fatality rate in people aged >/= 50. Dengue virus serotypes 1 and 4 [the latter of which is an emerging serotype in Brazil] were responsible for the outbreak

Diferenças na variação da competência vetorial entre nove populações de Aedes aegypti do munícipio de Belo Horizonte, Minas Gerais, ao Dengue virus 2

No Brasil, as epidemias de dengue ainda estão difundidas por todo o país. Além da falta de conhecimento de como os surtos da doença são capazes de iniciar e sustentar o seu ciclo de transmissão, existem poucos estudos avaliando a habilidade das populações brasileiras de A. aegypti para transmitir o vírus. O objetivo do nosso estudo foi comparar a susceptibilidade de A. aegypti capturados nas nove regionais de Belo Horizonte, ao DENV-2, nos anos de 2009 e 2011. Para tal finalidade, parâmetros como a taxa de infecção (IR), competência vetorial (CV) e a taxa de infeção disseminada(DIR) foram determinadas. Os ovos dos A. aegypti de cada regional foram coletadas separadamente e colonizados em um insetário. As fêmeas adultas foram infectadas experimentalmente com DENV-2 e o vírus foi detectado através da RT-qPCR nas amostras dos corpos e cabeças dos mosquitos. Os dados foram analisados através do programa estatístico Social Sciences – versão 17. A IR variou de 40% a 82,5% em 2009 e de 60% a 100% em 2011. A CV variou de 25% a 77,5% em 2009 e de 25% a 80% em 2011. Já a DIR oscilou de 68,7% a 100% em 2009 e 38,4% a 86,8% em 2011.

Os resultados foram avaliados por um modelo logístico utilizando IR como co-variável. Em 2009, as regionais Norte, Barreiro, Centro-Sul e Venda Nova mostraram uma forte associação. Em 2011, uma forte associação foi observada entre as regionais Centro-Sul,Venda Nova, Oeste e Nordeste. Utilizando a competência vetorial com co-variável, em 2009, as regionais Centro-Sul e Venda Nova apresentaram associação mais relevante. Já em 2011, as regionais Centro-Sul, Venda Nova e Barreiro apresentaram associação significativa. Quando os dados de DIR foram analisados pelos modelos de regressão logística, Pampulha, Centro-Sul, Venda Nova, Oeste, Nordeste e Leste (2009), bem como, Centro-Sul, Venda Nova e Oeste (2011) foram as regionais que apresentaram a associação mais forte. Concluí-se que as populações de A. aegypti de Belo Horizonte exibiram ampla variação na sua competência vetorial para transmitir DENV-2. Por isso,dados e estratégias de controle do vetor, de cada uma das regionais, precisam estar disponíveis para os órgãos competentes. Análises futuras precisam ser desenvolvidas para um melhor entendimento das razões pelas quais ocorre esta grande variabilidade na CV e como estes parâmetros se correlacionam com os achados epidemiológicos dos anos seguintes.

Virus del dengue de serotipo 1 (DENV-1) de Colombia: su contribución a la presentación del dengue en el departamento de Santander / Dengue virus serotype 1 (DENV-1) from Colombia: its contribution to dengue occurrence in Santander

Introducción. Los cuatro serotipos del virus del dengue circularon en el departamento de Santander entre 1998 y 2008. No existe información sobre el papel del serotipo 1 (DENV-1) en la epidemiología de la enfermedad. Objetivo. Analizar la relación entre el cambio de predominancia del (DENV-1) con su diversificación genética, predominancia de los otros serotipos y presentación del dengue grave. Materiales y métodos. La diversificación genética se estudió por análisis filogenético usando la secuencia del gen E de 12 cepas del virus. Para el análisis se utilizaron datos sobre predominancia de los serotipos obtenidos en estudios previos y datos oficiales de incidencia del dengue. Resultados. Los virus seleccionados se agruparon en el genotipo V junto a (DENV-1) de países de Latinoamérica y se evidenció segregación en cuatro linajes. Los cambios en la predominancia del virus coincidieron con el reemplazo de linaje y esto, a su vez, con incremento en la prevalencia de DENV-2 y DENV-3, e incremento del dengue grave. Conclusión. La diversificación genética podría contribuir a cambios de predominancia de (DENV-1), y la relación del virus con el DENV-2 y DENV-3 en situaciones que favorecen la presentación de casos graves. Se necesitan más estudios para precisar el papel de los serotipos en la epidemiología del dengue.

Introduction: Between 1998 and 2008 all dengue virus serotypes circulated in the Departamento de Santander, an endemic region in northeastern Colombia. No information is available as to the role of serotype 1 (DENV-1) with respect to epidemiology of dengue. Objective: To analyze the relationship between changes in DENV-1 predominance with respect to genetic diversity, prevalence of others serotypes and occurrence of severe dengue. Methods: Virus genetic diversity was studied by phylogenetic analysis comparing E gene sequences from 12 viral strains. Data about serotypes predominance obtained in previous studies and official data about dengue incidence were used for analysis. Results: Selected viruses grouped into genotype V together DENV-1 from Latin America countries, and segregation in four lineages was evidenced. Changes in virus predominance coincided with replacement of lineage, increase in prevalence of DENV-2 and DENV-3 and increase of severe dengue. Conclusion: Genetic divergence could have contributed to changes in DENV-1 predominance. The relationship of the virus with DENV-2 and DENV-3 could create scenarios that promote occurrence of severe cases. More studies are required to ascertain the precise role of serotypes in the epidemiology of dengue.

Epidemiología molecular de los virus Dengue / Molecular epidemiology of Dengue virus

El dengue es la enfermedad viral más importante transmitida por mosquitos a humanos por su alta morbimortalidad y el potencial de diseminación de su vector Aedes aegypti. Además, la falta de una vacuna y medicamentos antivirales específicos, así como el incremento progresivo de las infecciones secundarias y la hiperendemicidad en diferentes países, hacen de esta enfermedad un problema de salud pública. Existen cuatro serotipos del virus del dengue (DENV), dentro de cada serotipo se han descrito varios genotipos, constituidos a su vez por diferentes linajes o clados. La epidemiología molecular combina los análisis filogenéticos de los DENV detectados en un área geográfica, en un tiempo definido, con la información clínica y epidemiológica disponible. El objetivo de estos estudios es tratar de establecer asociaciones entre genotipos o linajes virales con el origen (ancestros), procedencia geográfica, ruta de transmisión viral, severidad de la enfermedad, grupos poblacionales afectados, y la intensidad y extensión de los brotes epidémicos. La epidemiología molecular ha generado información relevante como la etiología del DENV genotipo Asiático en los casos graves de dengue de la epidemia ocurrida en Venezuela en 1989, y la identificación de cambios nucleotídicos puntuales en el genoma viral asociados a propiedades biológicas fundamentales. En la actualidad se hace necesario realizar análisis exhaustivos del genoma viral completo, conjuntamente con el análisis bioinformático, biológico, clínico y epidemiológico de los cuatro serotipos circulantes en los países endémicos, así como instaurar en los laboratorios adscritos a los sistemas de vigilancia epidemiológica del dengue, la vigilancia molecular para la identificación de genotipos (o linajes) circulantes, lo que contribuiría entre otros aspectos al control efectivo de la enfermedad por DENV.

Dengue is the most important viral disease transmitted by mosquitoes to humans in tropical and subtropical regions of the world. This is the result of its high morbidity and mortality, the spread potential of the vector Aedes aegypti, the lack of effective vaccines and specific antiviral drugs, the gradual increase in secondary infections and hyperendemicity differences in distinct countries. There are four serotypes of dengue virus which are phylogenetically grouped in genotypes and subdivided in lineages or clades. Molecular epidemiology combines phylogenetic analysis of DENV detected in particular geographic areas within a defined time with the available clinical and epidemiologic information. The objective of these studies is to look for relationships between genotypes or lineages, viral origin, geographical spreading and routes of viral transmission, disease severity, population groups affected, and the intensity, speed and extent of outbreaks. Also, molecular epidemiology has generated relevant information such as the Asian genotype DENV etiology in cases of the severe dengue epidemic in Venezuela in 1989, and the identification of specific nucleotide changes in the viral genome associated with its fundamental biological properties. However, analysis of the complete viral genome, together with bioinformatic, biological, clinical and epidemiological analysis corresponding to the four serotypes circulating in endemic countries should be performed. Molecular surveillance for the identification of genotypes (or strains) circulating should be implemented in the laboratories responsible for the epidemiological surveillance of dengue, which would improve the effective control of DENV.